Phire® Plant Direct PCR Kit w/o Harris

 Amplifikacja DNA bezpośrednio z tkanki roślinnej

• Zoptymalizowane zestawy idealne do bezpośredniej reakcji PCR z różnorodnego materiału biologicznego.
• Brak czasochłonnego i kosztownego etapu izolacji DNA z materiału wyjściowego.
• Wykorzystanie termostabilnej, odpornej na inhibitory PCR  polimerazy  Phire® Hot Start II zapewnia wysoką wydajność i szybkość amplifikacji.
• Prosty i szybki protokół reakcji – dostępne wersje typu direct oraz dilution.
• Wygodne akcesoria dołączone do zestawu umożliwiają pobranie precyzyjnej ilości materiału wyjściowego.
• Dostępne zindywidualizowane protokoły dla niespecyficznego, trudnego materiału.

Właściwości Phire® Hot Start II DNA Polymerase

• Szybka aktywacja w pierwszym cyklu amplifikacji (,,quick hot start”) - zastosowanie technologii blokowania enzymu specyficznym ligandem białkowym w temperaturze pokojowej
• Wysoka szybkość działania enzymu -  4 - krotny wzrost szybkości amplifikacji w porównaniu ze standardową polimerazą Taq DNA Hot Start oraz niezwykle krótki czas wydłużania (10-15 s/kpz)
• Wygoda stosowania - minimalny czas optymalizacji reakcji oraz wysoka odporność na działanie endogennych inhibitorów reakcji PCR
• Wysoka wydajność - dodatkowa domena wiążąca dsDNA powoduje wzrost efektywności amplifikacji przy jednoczesnym zachowaniu wysokiej wierności kopiowania (2 - krotnie wyższa niż standardowe polimerazy  Taq)
•  Amplifikacja długich produktów PCR - możliwość amplifikacji fragmentów dłuższych niż 7 kpz.

Dwa krótkie protokoły użycia w zależności od potrzeb

W protokole bezpośrednim umieszczamy mały kawałek liścia bezpośrednio w mieszaninie PCR.

W protokole z rozcieńczeniem wykorzystujemy rozbity materiał roślinny zawieszony w buforze rozcieńczającym. Protokół ten jest wykorzystywany do trudnych amplifikacji oraz do oznaczeń, w których w tej samej próbce amplifikowanych jest kilka fragmentów DNA.

 Przykładowy testowany materiał:

• liście: Arabidopsis thaliana, kukurydza, ryż, bawełna, tytoń, winorośl
• tkanki utrwalone: kukurydza, pomidor, groch
• nasiona: jabłoń, marchew, dynia
• grzyby i mszaki: Magnaporthe sp, , Mycorrhiza, Physcomitrella patens

 Więcej informacji o testowanych materiałach.

Różne amplikony z DNA mitochondrialnego lub genomowego zostały pomyślnie zaplifikowane przy użyciu Phire Plant Direct PCR Ki, Piko® Thermal Cycler oraz cienkościennych probówek do PCR UTW®.

A) próbki liści Arabidopsis, papryki oraz kukurydzy zostały wycięte za pomocą Harris Uni-Core 0.50 mm, a następnie umieszczone w 50 µl mieszaniny PCR.

1. Arabidopsis, DNA mitochondrialne (1 kb)
2. Arabidopsis, 3.5 kb amplikon gDNA 
3. papryka, DNA mitochondrialne (1.4 kb)
4. kukurydza, DNA mitochondrialne (1.4 kb)
5. kontrola negatywna
6. kontrola pozytywna, Arabidopsis 1 kb DNA mitochondrialne,
7. kontrola pozytywna, Arabidopsis 3.5 kb amplikon gDNA.

B) próbki wyłuskanych nasion pomidora, kukurydzy oraz jabłka umieszczono w 20 µl mieszaninie PCR. Do dwóch amplifikacji DNA mitochondrialnego każdej z próbek użyto Phire Plant Direct PCR Kit. Uzyskane fragmenty DNA różniły się długością w zależności od rodzaju rośliny. + oraz - oznaczają reakcje kontrolne z lub bez oczyszczonego DNA.

Skład zestawu: