Maxima™ Reverse Transcriptase

nr kat.: EP0742

Opakowanie: 10000 U

Cena brutto: do wyceny

ilość

szt.

towar niedostępny

dodaj do przechowalni

Producent:

nr kat.: EP0742

Opis

Sprawdź także: LS53 FastGene Scriptase II

*********************************************************************

Wysoka czułość i powtarzalność syntezy cDNA z szerokiego zakresu RNA(1 pg - 5 μg).
Zwiększony współczynnik syntezy - całkowita synteza cDNA w czasie 15-30 minut.
Zwiększona temperatura reakcji do 65°C.
Wygodny format - enzym jest dostarczany w gotowej mieszaninie (typu premixed).
Przyłącza zmodyfikowane nukleotydy.

Maxima® Reverse Transcriptase (RT) została stworzona na drodze ewolucji in vitro M-MuLV RT. Enzym posiada aktywność polimerazy DNA- i RNA- zależnej jak również aktywność RNAzy H. Enzym wyróżnia się znacząco podwyższoną termostabilnością, wytrzymałością oraz wydajnością w porównaniu z dzikim typem. Maxima® Reverse Transcriptase jest zdolna do powtarzalnej syntezy cDNA w szerokim zakresie ilości RNA wyjściowego (1 pg - 5 µg) oraz w podwyższonej temperaturze (50 - 65°C). Dzięki wysokiej wydajności reakcja syntezy może być zakończona już w przeciągu 15-30 min.

Zastosowanie

2 step RT-PCR
2 step qRT-PCR
Synteza pierwszej nici cDNA
Konstrukcja bibliotek pełnej długości cDNA
Znakowanie DNA
Wydłużanie starterów

Rys. 1. Wysoka termostabilność Maxima® Reverse Transcriptase w 50°C.

Odwrotne transkryptazy były inkubowane w 1X buforze reakcyjnym. W wyznaczonych punktach czasowych 5-240 min. sprawdzono stopień aktywności.

Rys. 2. Amplifikacja matrycdo 20 kb w 2 step RT-PCR.
1 µg całkowitego RNA z komórek Jurkat (1 oraz 2) lub całkowite RNAz myszy mouse (3 oraz 4) zostało wykorzystane do reakcji odwrotnej transkrypcji z Maxima® Reverse transcriptase oraz innych odwrotnych transkryptaz w optymalnych warunkach dla każdego enzymu. Zsyntetyzowane cDNA zostało wykorzystane w PCR z Long PCR Enzyme Mix (#K0181) oraz starterami specyficznymi dla różnych genów:
1 – 6.8 kb POLE (ludzka polimeraza)
2 – 9.4 kb FBN1 (ludzka fibrylina 1)
3 – 13.3 kb Dmd (mysia dystrofina)
4 – 20.0 kb Neb (mysia nebulina)
M – GeneRuler™ 1 kb Plus DNA Ladder (#SM1331)

Porównanie właściwości odwrotnych transkryptaz dostępnych w firmie (Thermo Scientific) Fermentas

Odwrotna transkryptaza	Optymalna temp. reakcji	Aktywna do temp.	Długość odczytu	Aktywność RNase H	Inaktywacja	Units/20 µl reakcji	Czułość (RNA całkowite)
Maxima H Minus Reverse Transcriptase	50-55°C	65°C	20 kb	-	85°C, 5 min	200 u	1pg
Maxima™ Reverse Transcriptase	50-55°C	65°C	20 kb	+	85°C, 5 min	200 u	1 pg
RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase	50-55°C	60°C	20 kb	–	85°C, 5 min	200 u	1 pg
RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase	42-45°C	55°C	13 kb	–	70°C, 10 min	200 u	0.1 ng
RevertAid™ Reverse Transcriptase	42°C	50°C	13 kb	+	70°C, 10 min	200 u	0.1 ng
M-MuLV Reverse Transcriptase	37°C	45°C	9 kb	+	70°C, 10 min	40 u	100 ng