Maxima™ Reverse Transcriptase
Opis
Sprawdź także: LS53 FastGene Scriptase II
*********************************************************************
- Wysoka czułość i powtarzalność syntezy cDNA z szerokiego zakresu RNA(1 pg - 5 μg).
- Zwiększony współczynnik syntezy - całkowita synteza cDNA w czasie 15-30 minut.
- Zwiększona temperatura reakcji do 65°C.
- Wygodny format - enzym jest dostarczany w gotowej mieszaninie (typu premixed).
- Przyłącza zmodyfikowane nukleotydy.
Maxima® Reverse Transcriptase (RT) została stworzona na drodze ewolucji in vitro M-MuLV RT. Enzym posiada aktywność polimerazy DNA- i RNA- zależnej jak również aktywność RNAzy H. Enzym wyróżnia się znacząco podwyższoną termostabilnością, wytrzymałością oraz wydajnością w porównaniu z dzikim typem. Maxima® Reverse Transcriptase jest zdolna do powtarzalnej syntezy cDNA w szerokim zakresie ilości RNA wyjściowego (1 pg - 5 µg) oraz w podwyższonej temperaturze (50 - 65°C). Dzięki wysokiej wydajności reakcja syntezy może być zakończona już w przeciągu 15-30 min.
Zastosowanie
- 2 step RT-PCR
- 2 step qRT-PCR
- Synteza pierwszej nici cDNA
- Konstrukcja bibliotek pełnej długości cDNA
- Znakowanie DNA
- Wydłużanie starterów
Rys. 1. Wysoka termostabilność Maxima® Reverse Transcriptase w 50°C.
Odwrotne transkryptazy były inkubowane w 1X buforze reakcyjnym. W wyznaczonych punktach czasowych 5-240 min. sprawdzono stopień aktywności.
Rys. 2. Amplifikacja matrycdo 20 kb w 2 step RT-PCR.
1 µg całkowitego RNA z komórek Jurkat (1 oraz 2) lub całkowite RNAz myszy mouse (3 oraz 4) zostało wykorzystane do reakcji odwrotnej transkrypcji z Maxima® Reverse transcriptase oraz innych odwrotnych transkryptaz w optymalnych warunkach dla każdego enzymu. Zsyntetyzowane cDNA zostało wykorzystane w PCR z Long PCR Enzyme Mix (#K0181) oraz starterami specyficznymi dla różnych genów:
1 – 6.8 kb POLE (ludzka polimeraza)
2 – 9.4 kb FBN1 (ludzka fibrylina 1)
3 – 13.3 kb Dmd (mysia dystrofina)
4 – 20.0 kb Neb (mysia nebulina)
M – GeneRuler™ 1 kb Plus DNA Ladder (#SM1331)
Porównanie właściwości odwrotnych transkryptaz dostępnych w firmie (Thermo Scientific) Fermentas
Odwrotna transkryptaza |
Optymalna temp. reakcji |
Aktywna do temp. |
Długość odczytu |
Aktywność RNase H |
Inaktywacja |
Units/20 µl reakcji |
Czułość (RNA całkowite) |
Maxima H Minus Reverse Transcriptase | 50-55°C | 65°C | 20 kb | - | 85°C, 5 min | 200 u | 1pg |
Maxima™ Reverse Transcriptase |
50-55°C |
65°C |
20 kb |
+ |
85°C, 5 min |
200 u |
1 pg |
RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase |
50-55°C |
60°C |
20 kb |
– |
85°C, 5 min |
200 u |
1 pg |
RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase |
42-45°C |
55°C |
13 kb |
– |
70°C, 10 min |
200 u |
0.1 ng |
RevertAid™ Reverse Transcriptase |
42°C |
50°C |
13 kb |
+ |
70°C, 10 min |
200 u |
0.1 ng |
M-MuLV Reverse Transcriptase | 37°C | 45°C | 9 kb | + | 70°C, 10 min | 40 u | 100 ng |
Dane techniczne
Opakowanie | 2000 U |