Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kitsis Kit

Uwaga! Nastąpiła zmiana nazwy z RevertAid™ Premium First Strand cDNA Synthesis Kit na Maxima® H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit.

Thermo Scientific Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit jest kompletnym systemem do odwrotnej transkrypcji. Zestwa zawiera najnowszą odwrotną transkryptazę Maxima H Minus Reverse Transcriptase (RT).
Maxima H Minus Reverse Transcriptase (RT) została stworzona na drodze ewolucji in vitro M-MuLV RT.
Enzym posiada aktywność polimerazy DNA- i RNA- zależnej bez aktywności RNAzy H. Enzym wyróżnia się znacząco podwyższoną termostabilnością, 50x wyższą procesywnością ,wytrzymałością oraz podwyższonym stopniem syntezy w porównaniu z dzikim typem M-MuLV RT.
Wyeliminowana za pomocą mutacji aktywność RNazy H umożliwia generowanie transkryptów o długości nawet 20 kb. Dzięki wysokiej termostabilności enzym utrzymuje pełną aktywność podczas całego procesu odwrotnej transkrypcji jednocześnie produkując duże ilości cDNA. W celu poprawienia wydajności transkrypcji regionów RNA z dużą ilością drugorzędowych struktur lub aby poprawić specyficzność w reakcji ze specyficznymi starterami, temperatura reakcji może być podniesiona nawet do 65°C. Dzięki wysokiej procesywności enzym Maxima H Minus jest wyjątkowo odporny na popularne inhibitory takie jak guanidyna, formamid oraz etanol. Zestaw zawiera zarówno oligo(dT)18 jak i losowe heksamery.

Charakterystyka Maxima H Minus Reverse Transcriptase

• Termostabilna – 90% aktywności po inkubacji w 50°C przez 60 minut w mieszaninie reakcyjnej.
• Aktywna w przedziale temperatury 45-65°C.
• Duża ilość pełnej długości produktu cDNA (nawet do 20 kb).
• Wysoka czułość – powtarzalna synteza cDNA przy szerokim zakresie ilości całkowitego RNA (od 1 pg do 5 µg).
• Wydajna – kompletna synteza cDNA w przeciągu 15-30 min.
• Podwyższona odporność na popularne inhibitory reakcji.
• Przyłącza modyfikowane nukleotydy.

Zastosowanie

• Synteza pierwszej nici cDNA do RT-PCR.
• Konstrukcja bibliotek cDNA.
• Tworzenie sond do hybrydyzacji.
• Synteza antysensownego RNA.

Skład

• Maxima H Minus Enzyme Mix zawiera Maxima H Minus Reverse Transcriptase oraz RiboLock RNase Inhibitor. RiboLock RNase Inhibitor efektywnie chroni matrycę RNA przed degradacją przez RNazy A, B oraz C w temperaturze do 55°C.
• Oligo(dT)18 oraz random hexamer primers. Losowe heksamery przyłączają się niespecyficznie i są wykorzystywane do syntezy cDNA ze wszystkich cząsteczek RNA. Oligo(dT)18 przyłączają się specyficznie do końca 3’ poly(A) RNA syntetyzując cDNA wyłącznie z mRNA zakończonych ogonkiem poly(A). Oprócz tego z zestawem można użyć startery specyficzne do konkretnego genu.
• 10 Mm dNTP mix.
• 5X RT Buffer.
• Woda wolna od nukleaz.

Porównanie właściwości odwrotnych transkryptaz dostępnych w firmie (Thermo Scientific) Fermentas