Genomic DNA Purification Kit

Genomic DNA Purification Kit przeznaczony jest do wydajnej izolacji genomowego DNA pochodzącego z różnych źródeł przy użyciu chloroformu. Przeprowadzenie ekstrakcji nie wymaga zastosowania fenolu i proteinazy. Izolacja opiera się na lizie komórki i selektywnej precypitacji DNA. Wyekstrahowane z zastosowaniem tego kitu DNA może być następnie wykorzystane w takich technikach jak: PCR klonowanie, sekwencjonowanie, Southern blot, etc.

Ekstrakcję z użyciem Genomic DNA Purification Kit można podzielić na sześć etapów:

• Inkubacja 200 µl badanej próby z 400 µl buforu do lizy w temperaturze 65°C w czasie 5 minut.
• Dodanie do mieszaniny 600 µl chloroformu (wirowanie przez 2 min., 10 tys. rpm).
• Przeniesienie górnej fazy (zawierajacej DNA) z nad osadu do świeżo przygotowanego roztworu do precypitacji (inkubacja w temperaturze pokojowej przez 1-2 minuty, wirowanie przez 2 min., 10 tys. rpm).
• Usunięcie supernatantu i zawieszenie DNA w 100 µl 1.2 M roztworu NaCl.
• Precypitacja z użyciem 300µl 70% etanolu (zamrożenie w temp. -20°C, wirowanie przez 3-4 min., 10 tys. rpm).
• Usunięcie etanolu i zawieszenie DNA w 100 µl jałowej wody.

Skład zestawu:

• Bufor do lizy (40 ml)
• Roztwór do precypitacji (8 ml,10x stężony)
• Roztwór NaCl (10 ml,1.2M)

Jedno opakowanie pozwala na ekstrakcję DNA z:

• 200 µl krwi
• 25-30 mg tkanki ssaczej
• 50-100 mg tkanki roślinnej
• 10-20 mg bakterii