Produkty
Producenci

FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase

nr kat.: EF0651
Opakowanie: 1000 U
Cena brutto: do wyceny
ilość szt.

towar niedostępny

dodaj do przechowalni

Opis

 

FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase jest aktywna we wszystkich buforach zarówno do PCR jak i  dla enzymów restrykcyjnych.
Enzym defosforyluje wszystkie typy końców DNA w 10 min. w 37 stopniach C. Ze względu na inaktywację w 75 stopniach C (5 min.), nie potrzebne jest usuwanie enzymu przed ligacją. 
 
Właściwości:
 
  • Szybka defosforylacja: 10 min w 37°C.
  • Szybka termiczna inaktywacja: 5 min w 75°C.
  • Aktywna w buforach dla enzymów restrykcyjnych oraz PCR.
  • Jeden protokół dla wszystkich rodzajów końców DNA.
  • Aktywna w stosunku do nukleotydów.
 
Zastosowanie
 
  • Defosforylacja wektorów do klonowania DNA w celu uniknięcia recyrkulizacji w trakcie ligacji.
  • Jednoczesne trawienie i defosforylacja wektorów DNA.
  • Oczyszczanie produktów PCR: degradacja nukleotydów w celu dalszego sekwencjonowania.
  • Defosforylacja końca 5’ kwasu nukleinowego w celu znakowania kinazą polinukleotydową T4.
  • Inne aplikacje gdzie niezbędna jest defosforylacja DNA lub RNA.
 

Przykładowe protokoły zastosowań
 
Oczyszczanie mieszaniny PCR przed sekwencjonowaniem
 
  
Procedura ta ma na celu usunięcie niewykorzystanych starterów oraz nukleotydów. Uzyskane w ten sposób produkty PCR są gotowe do sekwencjonowania i nie wymagają już dalszego oczyszczania np. na kolumnach.
 
1. Przygotuj następującą mieszaninę:
 
Mieszanina PCR (bezpośrednio po zakończeniu PCR)
5 µl
Exonuclease I (EN0581/ EN0582)
0.5 µl (10 u)
FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase
1 µl (1 u)
 
2. Dobrze wymieszaj, a następnie przeprowadź inkubację w 37°C przez 15 minut.
3. Zatrzymaj reakcję poprzez inkubację w 85°C przez 15 min.                                                    
 
 
Uwagi:
 
  • Do 5 µl oczyszczonych produktów PCR może być wykorzystane do reakcji sekwencjonowania bez dalszego oczyszczania.
  • Aby wyniki sekwencjonowania były rzetelne w mieszaninie nie powinno być niespecyficznych produktów PCR.
  • Protokół może być użyty do oczyszczania produktów PCR wygenerowanych przez każdą termofilną polimerazę DNA lub mieszaninę polimeraz.
  • Procedura nie jest polecana do dalszych aplikacji związanych z klonowaniem.
 

 
Usuwanie grup fosforanowych z końców 3’ i 5’ DNA oraz RNA.
  
Poniższy protokół jest przedstawia przykładową defosforylację ~ 3 kb liniowego wektora DNA.
 
1. Przygotuj następującą mieszaninę:
 
Linearne DNA (~3 kb plazmid)
1 µg  (~pmol termini)
10X FastAP™ bufor reakcyjny
2 µl
FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase
1 µl (1 u)
Woda
Do 20 µl
Objętość końcowa
20 µl
 
 
2. Dokładnie wymieszaj, krotko zwiruj i inkubuj w 37°C przez 10 minut.
3. Zatrzymaj reakcję poprzez inkubację w temperaturze 75°C przez 5 minut.
 
 
Uwagi
 
 Aby defosforylacja była wydajna DNA plazmidowe powinno być wolne od zanieczyszczeń RNA i DNA genomowego.

Dane techniczne

Opakowanie 1000 U

Produkty powiązane

do góry
Sklep jest w trybie podglądu
Pokaż pełną wersję strony
Sklep internetowy Shoper.pl