FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase
Opis
Enzym defosforyluje wszystkie typy końców DNA w 10 min. w 37 stopniach C. Ze względu na inaktywację w 75 stopniach C (5 min.), nie potrzebne jest usuwanie enzymu przed ligacją.
- Szybka defosforylacja: 10 min w 37°C.
- Szybka termiczna inaktywacja: 5 min w 75°C.
- Aktywna w buforach dla enzymów restrykcyjnych oraz PCR.
- Jeden protokół dla wszystkich rodzajów końców DNA.
- Aktywna w stosunku do nukleotydów.
- Defosforylacja wektorów do klonowania DNA w celu uniknięcia recyrkulizacji w trakcie ligacji.
- Jednoczesne trawienie i defosforylacja wektorów DNA.
- Oczyszczanie produktów PCR: degradacja nukleotydów w celu dalszego sekwencjonowania.
- Defosforylacja końca 5’ kwasu nukleinowego w celu znakowania kinazą polinukleotydową T4.
- Inne aplikacje gdzie niezbędna jest defosforylacja DNA lub RNA.
Mieszanina PCR (bezpośrednio po zakończeniu PCR) | 5 µl |
Exonuclease I (EN0581/ EN0582) | 0.5 µl (10 u) |
FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase | 1 µl (1 u) |
- Do 5 µl oczyszczonych produktów PCR może być wykorzystane do reakcji sekwencjonowania bez dalszego oczyszczania.
- Aby wyniki sekwencjonowania były rzetelne w mieszaninie nie powinno być niespecyficznych produktów PCR.
- Protokół może być użyty do oczyszczania produktów PCR wygenerowanych przez każdą termofilną polimerazę DNA lub mieszaninę polimeraz.
- Procedura nie jest polecana do dalszych aplikacji związanych z klonowaniem.
Linearne DNA (~3 kb plazmid) | 1 µg (~pmol termini) |
10X FastAP™ bufor reakcyjny | 2 µl |
FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase | 1 µl (1 u) |
Woda | Do 20 µl |
Objętość końcowa | 20 µl |
Dane techniczne
Opakowanie | 1000 U |