Właściwości:
-
Wydajna synteza cDNA w temperaturze 45-60ºC.
-
Brak aktywności RNazy H - duża ilość produktu pełnej długości do 20 kb.
-
Wydajna, całkowita synteza cDNA w 30 minut.
-
Wysoka czułość i specyficzność.
-
Stworzona dzięki ewolucji in vitro.
Zastosowanie
-
Synteza pierwszej nici cDNA,
-
RT-PCR,
-
RT-qPCR,
-
konstrukcja bibliotek cDNA,
-
tworzenie sond do hybrydyzacji,
-
amplifikacja RNA.
RevertAid™ Premium First Strand cDNA Synthesis Kit jest kompletnym systemem do wysoce wydajnej syntezy pierwszej nici cDNA. W skład zestawu wchodzi RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase, zaawansowana odwrotna transkryptaza stworzona dzięki ewolucji M-MuLV RT in vitro. Enzym charakteryzuje się wysoką termostabilnością (do 60°C) oraz zwiększonym stopniem syntezy cDNA w porównaniu do innych pochodnych M-MuLV RT. Dzięki punktowej mutacji w domenie RNazy H udało się całkowicie usunąć jej aktywność zapewniając tym samym dużą ilość produktu pełnej długości do 20 kb. Dzięki zwiększonej syntezie cDNA, synteza może być zakończona już po 30 min.
RevertAid™ Premium Enzyme Mix zawiera RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase oraz inhibitor RNaz Ribolock™ RNase Inhibitor. inhibitor RNaz skutecznie chroni RNA przed RNazą A, B, C w temperaturze do 55°C.
W skład zestawu wchodzą również startery Oligo(dT)18 oraz Random Hexamer Primers. Random Hexamer Primers wiążą się niespecyficznie do sekwencji i są używane do syntezy cDNA ze wszystkich cząsteczek RNA całkowitego. Oligo(dT)18 wiążą się specyficznie do końca 3’ poly(A) RNA syntetyzując cDNA wyłącznie z mRNA zakończonych poly(A). Oprócz tego można wykorzystać własne startery specyficzne do genu.
RevertAid™ Premium Enzyme Mix zawiera RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase oraz inhibitor RNaz Ribolock™ RNase Inhibitor. inhibitor RNaz skutecznie chroni RNA przed RNazą A, B, C w temperaturze do 55°C.
W skład zestawu wchodzą również startery Oligo(dT)18 oraz Random Hexamer Primers. Random Hexamer Primers wiążą się niespecyficznie do sekwencji i są używane do syntezy cDNA ze wszystkich cząsteczek RNA całkowitego. Oligo(dT)18 wiążą się specyficznie do końca 3’ poly(A) RNA syntetyzując cDNA wyłącznie z mRNA zakończonych poly(A). Oprócz tego można wykorzystać własne startery specyficzne do genu.
Rys. 1.
1 µg całkowitego RNA z komórek Jurkat zostało zsytnetyzowane przy pomocy RevertAid™ Premium first Strand cDNA Synthesis Kit z Oligo(dT)18, a następnie zamplifikowane z cDNA przy użyciu Long PCR Enzyme Mix (#K0181) w temp. do 60°C.
Rys. 2.
Wyższa czułość w dwustopniowym RT-PCR przy użyciu RevertAid™ Premium First Strand cDNA Synthesis Kit.
Całkowite RNA z komórek Jurkat (100 pg, 10 pg, 1 pg oraz 0,1 pg) zostało użyte w reakcji odwrotnej transkrypcji z RevertAid™ Premium First Strand cDNA Synthesis Kit w 50°C oraz z zestawami z inną odwrotną trankryptazą M-MuLV w 42°C przy użyciu Oligo(dT)18 w 20 µl. 2 µl mieszanin reakcyjnych z RT zostało następnie wykorzystane w reakcji PCR z Maxima™ Hot Start Taq DNA Polymerase (#EP0601) i starterami specyficznymi do genu GAPDH.
Całkowite RNA z komórek Jurkat (100 pg, 10 pg, 1 pg oraz 0,1 pg) zostało użyte w reakcji odwrotnej transkrypcji z RevertAid™ Premium First Strand cDNA Synthesis Kit w 50°C oraz z zestawami z inną odwrotną trankryptazą M-MuLV w 42°C przy użyciu Oligo(dT)18 w 20 µl. 2 µl mieszanin reakcyjnych z RT zostało następnie wykorzystane w reakcji PCR z Maxima™ Hot Start Taq DNA Polymerase (#EP0601) i starterami specyficznymi do genu GAPDH.
Skład zestawu:
-
RevertAid™ Premium Enzyme Mix
-
5X RT Buffer
-
dNTP Mix, 10 mM each
-
Oligo(dT)18 Primer
-
Random Hexamer Primer
-
Water, nuclease-free
-
Detailed protocol
Informacje do zamówienia:
|
Nr kat.
|
Wielkość
|
|
K1651
|
20 reakcji
|
|
K1652
|
100 reakcji
|
Więcej na stronie producenta:
Logowanie
Centrum zamówień
Kontakt