Cechy

Zastosowanie:

Tępienie i fosforylacja dwuniciowego DNA (sonikowane, nebulizowane, trawione enzymami restrykcyjnymi, cDNA, produkty PCR).

Skład:

Opis
Fast DNA End Repair Kit jest służy do tępienia i fosforylacji końców DNA, które ma być wykorzystane w reakcji  ligacji tępych końców. Wszystkie składniki są  wstępnie wymieszane, aby zmniejszyć ilość kroków pipetowania oraz ułatwić pracę.
End Repair Enzyme Mix zawiera zoptymalizowaną mieszaninę polimerazy T4 oraz fragment Klenowa, aby zapewnić wysoce wydajny proces tępienia oraz fosforylacji końców DNA.
10X End Repair Reaction Mix zawiera zoptymalizowany bufor reakcyjny oraz ATP i dNTPs.

Próbki kompatybilne z zestawem:
- pofragmentowane genomowe DNA (trawione enzymami restrykcyjnymi, nebulizowane lub sonikowane),
- DNA plazmidowe enzymami restrykcyjnymi,
- dwuniciowe cDNA,
- oraz produkty PCR zawierające ogonki dA.

Podczas reakcji naprawy DNA, pofragmentowane DNA jest zmieniane w tępo zakończone DNA zawierające grupy fosforanowe 5’ oraz grupy hydroksylowe 3’. 
Aktywność 5’→3’ mieszaniny polimerazy z End Repair Enzyme Mix wypełnia wysunięte końce 5’ podczas gdy aktywność 3’→5’ egzonukleazy usuwa ogonki 3’. Polimeraza T4 dodaje 5’- fosforany do końców niefosforylowanych fragmentów DNA takich jak produkty PCR. Tabela 1, rysunek 1.

 

Tabela 1. Aktywność enzymatyczna End Repair Enzyme Mix

Aktywność	Wykorzystywany enzym	Typ końców DNA ulegających naprawie
aktywność polimerazy 5’→3’	T4 DNA Polymerase, Klenow Fragment	ogonki 5’
aktywność egzonukleazy 3’→5’	T4 DNA Polymerase, Klenow Fragment	ogonki 3’
aktywność fosfatazy - 3’	T4 PNK	sonikowane DNA - 3’-P
aktywność kinazy - 5’	T4 PNK	niefosforylowane DNA (np., produkty PCR)

 

Rys. 1. Tępienie i fosforylacja różnych typów końców DNA.

 

Informacje do zamówienia:

Nr katalogowy	Produkt	Wielkość opakowania
K0771	Fast DNA End Repair Kit	50 reakcji