NOWOŚĆ! Y2H Membrane Protein System
Systemy Jedno- i Dwuhybrydowe

Nowe narzędzie do detekcji i charakteryzacji protein wchodzących w interakcje z białkami błonowymi.
Dla Państwa wygody firma MoBiTec rozszerzyła swoją ofertę produktów dwuhybrydowych o nowe, innowacyjne narzędzie, pozwalające na wykrywanie białek oddziałujących z proteinami błonowymi (zintegrowanymi bądź tylko związanymi z błonami). Ta unikalna technologia pozwala na szybkie i wydajne wykrywanie białek, pomiędzy którymi zachodzi reakcja wiązania i przekazywanie sygnału. Istniejące dotychczas zestawy wykorzystujące inne technologie na to nie pozwalały. Dodatkowo system pozwala na wykrywanie nowych domen umożliwiających wiązanie (new binding sites).

Zastosowanie:
• Identyfikacja nowych interaktorów badanego białka błonowego poprzez screening biblioteki
• Potwierdzanie dimeryzacji znanych białek błonowych
• Określanie kluczowych aminokwasów biorących udział w interakcjach białko/białko
• Mapowanie stref interakcji błonowych

Zalety systemu:
• Wydajny screening in vivo w celu odnalezienia interaktorów membranowych (full-length) oraz związanych z błonami białek
• Zachowanie modyfikacji potranslacyjnych typu glikozylacja i mostki dwusiarczkowe
• Interakacje białko-białko są identyfikowane bezpośrednio tam, gdzie zachodzą naturalnie -w błonie

Opis działania:

Zestaw MoBiTecu Y2H Membrane Protein Kit wykorzystuje fuzję ubikwityny i białka naszego zainteresowania oraz cięcie przez ubikwityno-specyficzne proteazy (ubiquitin-specific proteases - UBPs) po podwójnym motywie glicynowym (Gly-Gly-X) zlokalizowanym na C-końcu ubikwityny. W przeciwieństwie do innych proteaz UBP nie rozpoznaje specyficznych sekwencji polipeptydowych, a tylko te występujące w ubikwitynie.

Białko typu bait (np.: znane białko błonowe) ulega fuzji do domeny Cub połączonej z białkiem reporterowym (TF reporter). Z drugiej strony białko typu prey (np.: białko cytozolowe lub błonowe z biblioteki) ulega fuzji do zmutowanej domeny NubG. Interakcja pomiędzy białkiem bait i prey powoduje zamknięcie domen NubG i Cub, odbudowe kompleksu tzw.: split-ubikwityna oraz uwolnienie białka reporterowego (czerwone) dzięki cięciu przez UBP.

Y2H Membrane Protein System jest narzędziem idealnym do screeningu oddziaływań pomiędzy białkami związanymi z błonami, jak i integralnych białek błonowych. W przeciwieństwie do drożdżowego systemu dwuhybrydowego Y2H Membrane Protein System nie zależy od lokalizacji białek typu bait i prey w jądrze. Dzięki Y2H Membrane Protein System można skanować pełnej długości integralne białka błonowe z wykorzystaniem biblioteki cDNA oraz charakteryzować nowych partnerów interakcji badanego białka.

W skład zestawu Y2H Membrane Protein Kit wchodzą:
• zoptymalizowane wektory typu bait i prey,
• drożdżowy szczep reporterowy NMY32 z markerami (growth and color) umożliwiającymi łatwe i szybkie wybieranie kolonii pozytywnych i eliminowanie kolonii fałszywie pozytywnych,
• zestaw plazmidów kontrolnych do testów funkcjonalnych i Western blotu,
• podręcznik użytkownika (w jęz. angielskim) wyjaśniający w jasny i przystępny sposób jak wykonać Y2H Membrane Protein screening.

Dodatkowo oferujemy (do nabycia osobno):
• wektory typu bait i prey,
• wektory do tradycyjnego drożdżowego systemu dwuhybrydowego,
• standardowe wektory do ekspresji drożdżowej,
• szczepy drożdżowe i biblioteki cDNA libraries do użycia z Y2H Membrane Protein System oraz konwencjonalne drożdżowe systemy dwuhybrydowe.

Zamawianie:

Numer katalogowy	Produkt	Ilość
P01001-3DS	Y2H Membrane Protein Kit, Version 3.0	1 kit
	pBT3- Typ I bait wektor pBT3- SUC-Typ I bait wektor pBT3- STE-Typ II bait wektor pBT3- N-Typ II bait wektor pBR3- N-prey wektor pBR3- C-prey wektor pBR3- SUC-prey wektor pBR3- STE-prey wektor pCCW- Alg5 kontrola dla typu bait pAI- Alg5 kontrola dla typu prey pDL2- Alg5 kontrola dla typu prey NMY51 drożdżowy szczep reporterowy Wektory typu bait oraz prey zawierają konstrukty z liderem drożdżowym oraz sekwencją sygnałową typu I. *dostarczane jako oczyszczony i liofilizowany plazmid	5 µg* 5 µg* 5 µg* 5 µg* 5 µg* 5 µg* 5 µg* 5 µg* 5 µg* 5 µg* 5 µg* 1 kultura (w płynie)
P09901DS	Y2H Membrane Protein Starter zawiera Y2H Membrane Protein Kit, Version 3.0, jeden Y2H β-galactosidiase assay kit oraz jeden Y2H yeast transformation kit (#P01001-3DS, #P01002DS and #P01003DS).	1 kit
Wektory do użycia w systemie Y2H Membrane Protein System:
P03230DS	pBT3-N , bait wektor typu II	5 µg
P03231DS	pBT3-C, bait wektor typu I	5 µg
P03232DS	pBT3-SUC, bait wektor typu I	5 µg
P03233DS	pBT3-STE, bait wektor typu I	5 µg
P03234DS	pPR3-N wektor biblioteki typu prey (orientacja NubG-cDNA orientation)	5 µg
P03235DS	pPR3-C wektor biblioteki typu prey (orientacja cDNA-Nub)	5 µg
P03236DS	pPR3-SUC wektor biblioteki typu prey (orientacja cDNA-NubG)	5 µg
P03237DS	pPR3-STE wektor biblioteki typu prey (orientacja cDNA-NubG)	5 µg
Dostarczane w suchym lodzie; primery i wektory należy przechowywać w -20°C, szczepy drożdżowe należy przechowywać w -70°C

Do ściągnięcia: Y2H Podręcznik w języku angielskim. Wersja 3.0 (pdf, 216 Kb)

W przypadku pytań prosimy o przejrzenie sekcji Najczęściej Zadawane Pytania FAQ

Mapy i sekwencje wektorowe do ściągnięcia: