|
Genomic DNA Purification Kit przeznaczony jest do wydajnej izolacji genomowego DNA pochodzącego z różnych źródeł przy użyciu chloroformu. Przeprowadzenie ekstrakcji nie wymaga zastosowania fenolu i proteinazy. Izolacja opiera się na lizie komórki i selektywnej precypitacji DNA. Wyekstrahowane z zastosowaniem tego kitu DNA może być następnie wykorzystane w takich technikach jak:
- Technika łańcuchowej polimerazy
- Klonowanie
- Sekwencjonowanie
- Southern blot
Ekstrakcję z użyciem Genomic DNA Purification Kit można podzielić na sześć etapów :
- Inkubacja 200µl badanej próby z 400µl buforu do lizy w temperaturze 65°C w czasie 5 minut.
- Dodanie do mieszaniny 600µl chloroformu (wirowanie przez 2 min., 10 tys. rpm).
- Przeniesienie górnej fazy (zawierajacej DNA) znad osadu do świeżo przygotowanego roztworu do precypitacji (inkubacja w temperaturze pokojowej przez 1-2 minuty, wirowanie przez 2 min., 10 tys. rpm).
- Usunięcie supernatantu i zawieszenie DNA w 100µl 1.2 M roztworu NaCl.
- Precypitacja z użyciem 300µl 70% etanolu (zamrożenie w temp. -20°C, wirowanie przez 3-4 min., 10 tys. rpm).
- Usunięcie etanolu i zawieszenie DNA w 100µl jałowej wody.
Opakowanie zawiera:
- Bufor do lizy (40ml)
- Roztwór do precypitacji (8ml,10x stężony)
- Roztwór NaCl (10ml,1.2M)
Jedno opakowanie pozwala na ekstrakcję DNA z :
- 200µl krwi
- 25-30mg tkanki ssaczej
- 50-100mg tkanki roślinnej
- 10-20mg bakterii
Nr katalogowy produktu - K0512 (100 reakcji).
|